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武漢科銳諾生物科技有限公司
主營：外泌體,透射電鏡,掃描電鏡,石蠟切片等技術(shù)服務(wù)
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| 先生： |
外泌體分離提取方案。主要方案包括：
1、差速超1速離心法；
適用于細(xì)胞上清、灌洗液、尿液等大體積的樣品；
2、基于PEG沉淀原理的試劑盒法；
適用于血1清、腦脊液等小體積的樣品；
3、超濾提取法；
適用于細(xì)菌培養(yǎng)液或外泌體含量較低的樣品濃縮。亦可搭配超1速離心法，做進(jìn)一步的提取。
外泌體是細(xì)胞外囊泡的一種，外泌體，其膜來源與粒徑范圍與細(xì)胞外囊泡相似，電鏡下，顯示出典型的茶托狀超微結(jié)構(gòu)。實際操作中，通過常規(guī)的單一的方法很難鑒定外泌體。鑒定外泌體需要包含形態(tài)、粒徑、表面分子標(biāo)記物等多方面的鑒定。具體方法包括：透射電鏡（形態(tài)鑒定）、NTA檢測（粒徑及濃度鑒定）、WB（分子標(biāo)志物）。NTA檢測作為外泌體鑒定的經(jīng)典方法之一，可同時反映出檢測樣品的濃度及粒徑。質(zhì)量較好，純度較高的外泌體樣品，粒徑分布在30-150nm，原液濃度在10^9左右。為了保證檢測質(zhì)量，外泌體測試服務(wù)，對每一個樣品，都會進(jìn)行3次技術(shù)重復(fù)。檢測周期為2-3個工作日，可當(dāng)天到樣當(dāng)天出結(jié)果。
樣本準(zhǔn)備
1. 提供外泌體懸液即可，未純化樣本也可以上機(jī)檢測；
注意：NTA僅提供粒徑分布情況和顆粒濃度，無法區(qū)分外泌體與非外泌體成分；當(dāng)然也可先利用外泌體特異性標(biāo)記物進(jìn)行熒光標(biāo)記，則可以獲知外泌體特定亞群的含量。
2.儀器的檢測區(qū)間是10^7 particles/ml，且有濃度檢測下限，為10^5 particles/ml，進(jìn)樣量不少于2ml；一般來說，會對樣本稀釋后進(jìn)樣；
我司無法準(zhǔn)確建議送樣量；檢測需要量與樣本本身濃度有關(guān)，樣本濃，則用量小，反之則多，根據(jù)檢測經(jīng)驗，樣本取用量一般在2μl-100μl不等，取用量大于50μl時大多由于樣本分泌量過低、提取失敗或者對樣本有過多稀釋。一般建議送樣量不低于30μl，如樣本珍貴，可聯(lián)系我司寄回，運(yùn)費(fèi)視具體情況收取。
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第3年
