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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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亞細(xì)胞定位原理
利用GFP、RFP等熒光蛋白具有的熒光性質(zhì)和靈敏性，來示蹤細(xì)胞內(nèi)的蛋白。將目標(biāo)蛋白與熒光蛋白的N端或者C端融合，通過瞬轉(zhuǎn)或穩(wěn)轉(zhuǎn)，使該融合蛋白在受體材料細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，目標(biāo)蛋白會牽引熒光蛋白一起定位到目標(biāo)細(xì)胞器，經(jīng)過激光共聚焦顯微鏡激光照射，熒光蛋白會發(fā)出熒光，蛋白互作，通過觀察熒光蛋白在細(xì)胞內(nèi)顯示的位置，從而可以確定目標(biāo)蛋白的亞細(xì)胞定位情況，即可對蛋白質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確定位。
細(xì)胞分餾和免疫印跡：先通過差速離心等方法將細(xì)胞勻漿分離成不同的亞細(xì)胞組分，如細(xì)胞核、線粒體、細(xì)胞質(zhì)等。然后，利用免疫印跡技術(shù)，使用針對目標(biāo)蛋白的特異性來檢測該蛋白在各個亞細(xì)胞組分中的存在情況，以此推斷其亞細(xì)胞定位。
電子顯微鏡技術(shù)：包括免疫電鏡技術(shù)等，可在超微結(jié)構(gòu)水平上對細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)等生物分子進(jìn)行定位。通過將特異性與細(xì)胞內(nèi)的目標(biāo)蛋白結(jié)合，再用電子顯微鏡觀察標(biāo)記物的位置，能夠地確定目標(biāo)蛋白在細(xì)胞內(nèi)的亞細(xì)胞定位。
直接法
將標(biāo)記的特異性熒光，直接加在抗原標(biāo)本上，經(jīng)一定的溫度和時間的染色，用水洗去未參加反應(yīng)的多余熒光，室溫下干燥后封片、鏡檢。
間接法
如檢查未知抗原，先用已知未標(biāo)記的特異（）與抗原標(biāo)本進(jìn)行反應(yīng)，用水洗去未反應(yīng)的，再用標(biāo)記的抗（第二）與抗原標(biāo)本反應(yīng)，使之形成—抗原—復(fù)合物，再用水洗去未反應(yīng)的標(biāo)記，干燥、封片后鏡檢。如果檢查未知，則表明抗原標(biāo)本是已知的，待檢為，其它步驟的抗原檢查相同。
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